Превращение вируса в «фабрику» антител: как это произошло

Дисплейные методы, как и метод гибридóм, начинаются с иммунизации животного. Этот этап нужен, чтобы получить антитела, из которых затем мы будем выбирать лучшее. Однако, в отличие от ограниченного набора антител-кандидатов в методе гибридóм, с помощью дисплейных методов можно «перебрать» сразу миллиарды последовательностей потенциальных антител.

Самым популярным из всех дисплейных методов считается фаговый дисплей. Он заключается в том, чтобы «заставить» бактериофаг М13 выставлять на своей поверхности (от англ. display — отсюда название метода) фрагменты антитела. Каждый отдельный бактериофаг представляет последовательность только одного антитела, а в одной пробирке таких вирусных частиц могут быть миллиарды. Такие масштабы достигаются за счет высокопроизводительных методов молекулярного клонирования. Затем, в результате нескольких раундов селекции, из миллиардов потенциальных последовательностей отбирают единственный кандидат, который станет будущим антителом.

Главное преимущество фагового дисплея — в огромном разнообразии молекул-кандидатов: в одном раунде удается «прогнать» миллиарды последовательностей. Также среди плюсов, которые отличают фаговый дисплей от метода гибридóм, стоит отметить возможность работы с полностью человеческими (а не мышиными) последовательностями, а также меньшие затраты времени — не нужно иммунизировать мышей, выделять из них В-лимфоциты и скрещивать их с клетками миеломы. В этом же кроется, пожалуй, и главный недостаток: фаговый дисплей — слишком искусственная система. На выходе мы получаем «огрызки» молекул — всего лишь вариабельные фрагменты, а не полноразмерные антитела. Не факт, что даже идеально связавшийся фрагмент-кандидат сможет наработаться в клетках.

Но, несмотря на свои ограничения, метод фагового дисплея остается очень популярным для получения моноклональных антител во многих фармацевтических компаниях. Если отработать лабораторный процесс до автоматизма, можно анализировать потенциальные антитела намного быстрее, чем с помощью гибридóм.

Источник